2 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Важность диагностики при вирусном заболевании

Ключевые методы лабораторной диагностики распространенных инфекций

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

Диагностика вирусных инфекций

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Методы диагностики протозойных инфекций

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Диагностика грибковых инфекций

Грибковые инфекции распространены не так широко, как вирусные или бактериальные потому, что они поражают в основном людей с ослабленным иммунитетом. Обычно при словах «грибковая инфекция» люди думают о заболеваниях кожи и ногтей, но сфера деятельности микозов шире: они могут поражать практически любые ткани. Самые распространенные грибковые поражения – это кандидоз, или молочница, микозы стоп, аспергиллез. При диагностике грибковых инфекций чаще всего используются следующие лабораторные методы:

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

Методы диагностики вирусных инфекций

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: «Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций. Профилактика вирусной инфекции»

Студент должен знать:

-морфологию, экологию, физиологию вирусов, методы их изучения;

-основы эпидемиологии вирусных инфекций (типы инфекций);

-основы химиотерапии и химиопрофилактики вирусной инфекции;

-факторы иммунитета при вирусных инфекциях.

Студент должен уметь:

-проводить профилактику вирусных инфекций;

-составлять алгоритмы действия в условиях эпидемии.

Вопросы для фронтального обсуждения:

1.Дайте понятие вирусам. Охарактеризуйте особенности строения и жизни вирусной частицы.

2.Какими факторами осуществляется защита организма человека от вируса.

3.Назовите группу и механизм действия препаратов на вирусы. Приведите примеры препаратов.

4.Назовите типы инфекции, вызываемые вирусами.

5. Назовите представителей кишечных, кровяных, респираторных вирусных инфекций, инфекций кожных покровов и слизистых.

6.Дайте понятие «Эпидемическому процессу», опишите структуру распространения инфекции среди населения.

7.Назовите, как называются мероприятия, ликвидирующие эпидемический процесс.

Самостоятельная работа студентов:

Запишите определения методов исследования вирусных инфекций.

Зарисйте в атлас внутриклеточные включения при натуральной оспе (тельца Гварниери), при бешенстве (тельца Бабеша-Негри).

3.Составьте план противоэпидемических мероприятий на вирусную инфекцию (инфекцию определяет преподаватель).

Краткие теоретические положения

Введение

Расширение возможностей в лечении и профилактике вирусных болезней с использованием противовирусных препаратов, иммуномодуляторов и вакцин с различным механизмом действия нуждается в быстрой и точной лабораторной диагностике. Узкая специфичность некоторых противовирусных препаратов также требует быстрой и высокоспецифичной диагностики инфицирующего агента. Появилась необходимость в количественных методах определения вирусов для мониторинга противовирусной терапии. Помимо установления этиологии заболевания лабораторная диагностика имеет важное значение в организации противоэпидемических мероприятий.

Ранняя диагностика первых случаев эпидемических инфекций позволяет своевременно провести противоэпидемические мероприятия – карантин, госпитализацию, вакцинацию и пр. Реализация программ по ликвидации инфекционных заболеваний, например натуральной оспы, показала, что по мере их выполнения возрастает роль лабораторной диагностики. Существенную роль играет лабораторная диагностика в службе крови и акушерской практике, например, выявление доноров, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом гепатита В (HBV), диагностика краснухи и цитомегаловирусной инфекции у беременных.

Методы диагностики вирусных инфекций

Для успешного выделения вирусов клинический материал должен быть взят в соответствии с патогенезом предполагаемого заболевания и в наиболее ранние сроки.

Как правило, берутся:

– при респираторных инфекциях – носоглоточный смыв;

– при энтеровирусных инфекциях – смыв и фекалии (рео-, энтеровирусы);

– при поражениях кожи и слизистых оболочек – соскобы, содержимое пузырьков (герпес, ветряная оспа);

– при экзантемных инфекциях – смывы (корь, краснуха);

– при арбовирусных инфекциях – кровь, спинномозговая жидкость.

1.Быстрые (экспресс-методы) — прямое обнаружение вируса или его компонентов (антигенов, НК), включений непосредственно в клиническом материале.

Читать еще:  Биопсия печени эффективность метода в современных условиях

А. Вирусоскопический метод заключается в об­наружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего используют электронный микроскоп. Световая микроскопия из-за нич­тожно малых размеров вирусов практически не применяется. При данном методе можно определить тип НК, размеры вириона, форму вириона, а также выявить внутрик­леточные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых инфек­циях.

II. Вирусологический метод основан на:

культивировании вирусов в чувствительных биологических системах (клеточных культурах, курином эмбрионе, организмах лабораторных животных),их индикации по цитопатогенному действию на биологическую систему (рис.1), идентификации по ингибиции действия вирусов соответствующими противовирусными антителами (рис.2).

Рис. 1. Цитопатическое действие вирусов на клетку: А-нормальный рост, Б-ЦПД вирусов на клетку

Рис.2 Ингибиция вируса антителами

Вирусологическое исследование — это «золотой стандарт» вирусологии и должно проводится в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

III. Серологический метод — определение противовирусных антител (оптимально — IgM) и/или определение динамики нарастания их титров за определенный период заболевания в парных сыворотках. Диагностически значимым считают нарастание титра антител в 4 и более раз.

Метод парных сывороток:осуществляем сбор венозной крови в количестве 10 мл в начале болезни и в конце, приготавливаем сыворотку, определяем количество антител в первой и второй сыворотке.

При этом четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперенесенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса Ig М, свидетельствующее об острой инфекции.

Современные методы диагностики:

1.ПЦР-выявляют персистирующие вирусы по НК, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаруживаемые другими методами.

2.Радиоизотопный иммунный анализ (РИА)-метод основан на метке антител радиоизотопами, что обеспечивало высокую чувствительность в определении вирусного антигена. Широкое распространение метод получил в 80-е годы, особенно для определения маркеров HBV и других некультивируемых вирусов. К недостаткам метода относится необходимость работать с радиоактивными веществами и использования дорогостоящего оборудования (гамма-счетчиков).

3.Иммуноферментный анализ (ИФА) – Иммуноферментные методы определения вирусных антигенов в принципе сходны с РИФ, но основываются на мечении антител ферментами, а не красителями. Наиболее широко используется пероксидаза хрена и щелочная фосфатаза, применяют также b-галактозидазу и b-лактамазы. Меченые антитела связываются с антигеном, и такой комплекс обнаруживается при добавлении субстрата для фермента, с которым конъюгированы антитела. Конечный продукт реакции может быть в виде нерастворимого осадка, и тогда учет проводится с помощью обычного светового микроскопа, или в виде растворимого продукта, который обычно окрашен (или может флюоресцировать или люминесцировать) и регистрируется инструментально.

Поскольку с помощью ИФА можно измерять растворимые антигены, то не требуется наличия интактных клеток в образце и таким образом могут использоваться различные виды клинического материала.

Другое важное преимущество метода ИФА – возможность количественного определения антигенов, что позволяет применять его для оценки клинического течения болезни и эффективности химиотерапии. ИФА, как и РИФ, может применяться как в прямом, так и в непрямом варианте.

Твердофазный ИФА, дающий растворимый окрашеный продукт реакции, нашел наибольшее распространение. ИФА может быть использован как для определения антигена (тогда на твердую фазу – дно лунки полистиролового планшета – наносятся антитела), так и для определения антител (тогда на твердую фазу наносятся антигены).

4.Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

В практике применяются два варианта РИФ: прямой и непрямой. В первом случае применяются меченные красителем антитела к вирусам, которые наносятся на инфицированные клетки (мазок, культура клеток). Таким образом, реакция протекает одноэтапно. Неудобством метода является необходимость иметь большой набор конъюгированных специфических сывороток ко многим вирусам.

При непрямом варианте РИФ на исследуемый материал наносится специфическая сыворотка, антитела которой связываются с вирусным антигеном, находящимся в материале, а затем наслаивается антивидовая сыворотка к гамма-глобулинам животного, в котором готовилась специфическая иммунная сыворотка, например антикроличья, антилошадиная и т. п. Преимущество непрямого варианта РИФ состоит в потребности лишь одного вида меченых антител.

Метод РИФ широко применяется для быстрой расшифровки этиологии острых респираторных вирусных инфекций при анализе мазков-отпечатков со слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Успешное применение РИФ для прямой детекции вируса в клиническом материале возможно лишь в случае содержания в нем достаточно большого числа инфицированных клеток и незначительной контаминации микроорганизмами, которые могут давать неспецифическое свечение.

5.Другие методы диагностики –

РТГА используется для диагностики заболеваний, вызванных гемагглютинирующими вирусами. Она основана на связывании антителами сыворотки больного добавленного стандартного вируса. Индикатором реакции являются эритроциты, агглютинирующиеся вирусом (формирование характерного «зонтика») при отсутствии специфических антител и оседающие на дно неагглютинированными при их наличии.

РСК является одной из традиционных серологических реакций и используется для диагностики многих вирусных инфекций. В реакции принимают участие две системы: антитела сыворотки больного + стандартный вирус и эритроциты барана + антитела к ним, а также оттитрованный комплемент. При соответствии антител и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса бараньих эритроцитов не происходит (положительная реакция). При отрицательной РСК комплемент способствует лизису эритроцитов. Недостатком метода является его недостаточно высокая чувствительность и трудность стандартизации реагентов.

Для учета значимости РСК также, как и РТГА, необходимо титрование парных сывороток, то есть взятых в начале заболевания и в период реконвалесценции.

РПГА – агглютинация сенсибилизированных вирусными антигенами эритроцитов (или полистироловых шариков) в присутствии антител. На эритроцитах могут быть сорбированы любые вирусы, независимо от наличия или отсутствия у них гемагглютинирующей активности. В связи с наличием неспецифических реакций сыворотки исследуются в разведении 1:10 и более.

РНГА – агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами в присутствии вирусных антигенов. Наибольшее распространение РОПГА получила при выявлении HBs-антигена как у больных, так и у доноров крови.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студентов недели бывают четные, нечетные и зачетные. 9667 — | 7538 — или читать все.

188.64.174.65 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Диагностика вирусных гепатитов

Диагностика вирусных гепатитов важный этап в жизни в любого человека, ведь зачастую течение заболевания может долго не проявляться. А в это время наносить сильный вред организму человека. Помимо этого инфицированный человек, не зная о наличии болезни может долгое время инфицировать окружающих.

Важность диагностики при вирусном заболевании

Раннее исследование вируса С необходимо для того, чтобы предотвратить серьезные осложнения работы печени. Так как первые симптомы этого заболевания практически отсутствуют, а некоторые штампы и вовсе долгое время никак себя не проявляют. Своевременное обнаружение и лечение помогают справиться с недугом на начальной стадии без инфицирования окружающих людей. Особенно раннее обследование необходимо женщинам во время вынашивания ребенка, так как есть вероятность инфицировать малыша.

Маркеры вируса

Заболевание делится на такие формы, как: инфекционный, лучевой, токсический и аутоиммунный.

Инфекционный делится на:

Токсический тип развивается вследствие воздействия алкогольных напитков, лекарств, наркотических и химических веществ. Это своего рода реакция организма на сильную и частую интоксикацию организма. Лучевая форма болезни весьма редкая и является следствием продолжительного или частого ионизирующего облучения пациента. А вот аутоиммунный развивается на фоне атаки иммунитета организма собственного органа в силу различных сбоев.

Самым распространенным же считается именно инфекционный тип.

Симптомы для каждой стадии

У каждого из маркеров есть стадии инкубационного периода и период обострения при которых симптомы проявления разные. Но в каждой форме при инкубационном периоде признаки отсутствуют. Далее они у всех характерны:

  • расстройство ЖКТ;
  • повышение температуры тела;
  • усталость и боль суставов;
  • увеличение печени и боль при ее пальпации;

При хронической инфекции наблюдается:

  • изменение цвета мочи и кала;
  • появляется желтушность глаз и кожи;
  • может наблюдаться сыпь кожных покровов (при форме В);
  • боль в области правого подреберья становится постоянной;
  • желтушность ярко выраженная;
  • появляется отвращение к пище;
  • нарушается сон;
  • появляются носовые кровотечения (при форме С).

Также стоит отметить, что симптомы у всех могут быть различны, это зависит от иммунитета больного и сопротивляемости организма.

Симптомы при различных формах

При маркере А первые симптомы проявляются только по окончанию инкубационного периода болезни. Результаты пцр анализа помогают получить представление о составе крови пациента и выявление типа антигенов. На основе этих данных удается понять, когда примерно было инфицирование и сопровождается ли инфекцией. После окончания инкубационного периода могут проявляться такие клинические признаки болезни:

  • расстройство ЖКТ;
  • слабость, вялость;
  • повышение температуры тела, озноб, повышенная потливость;
  • желтушность глаз, тела или языка.

Очень часто желтушность может и не наблюдаться, а остальные симптомы подходят и под другие заболевания. Так что больной может и не обратиться к врачу.

По сравнению с маркером А, тип В более опасен, так как может спровоцировать печеночный рак или цирроз. Данный штамп куда более агрессивен, но не передается через быт или при контакте с носителем. Клинические признаки:

  • боли в правой части тела на уровне ребер;
  • нарушение пищеварения (тошнота, рвота);
  • вялость, апатия;
  • боль в области суставов;
  • желтуха ;
  • моча темнеет, а кал светлеет.
Читать еще:  Гепаторенальный синдром практические рекомендации по диагностике и лечению

Маркер С отличается тем, что чаще мутирует и не дает возможности для создания вакцины. Также от последствий этого типа чаще всего настает смерть.

Штамп имеет все те же симптомы, что и другие виды, но к ним добавляется увеличение размеров селезенки и печени. Заразиться можно через медицинские не стерилизованные инструменты, кровь, плазму.

Методы диагностики вирусных гепатитов

Методы диагностики вирусных гепатитов делятся на инструментальные, лабораторные исследования и дифференциально.

К инструментальным относится:

  • УЗИ;
  • фиброэластография.

Лабораторный метод включает:

  1. Биохимия состава крови. Дает данные о воспалении органа и активности гепатита.
  2. Куагулограмма. С помощью этого метода оценивается показатель свертываемости крови.
  3. Экспресс тест. Определяет наличие в крови появление антител.
  4. Биопсия печени. С помощью биопсии можно получить данные о степени пораженности печени.
  5. ПЦР. Метод помогает определить код инфекции.
  6. ИФА. С помощью этого исследования определяется возможное инфицирование и наличие антител для борьбы с ним в крови.
  7. исследование на билирубин. При сильном повреждении количество билирубина возрастает, поэтому результат дает краткую клиническую картину без забора образца органа.
  8. Проба на белки.

Алгоритм на подтверждение гепатитов состоит в следующем:

  • сдача общего анализа крови и биохимии;
  • ПЦР;
  • исследование на антитела и антигены.

По результатам данных исследований назначается дальнейшее исследование и лечение.

Анализы

Лабораторная диагностика гепатитов дает возможность получить более полную картину о заболевании: его виду, степени прогресирования, реакции организма и тем самым помогает в назначении правильного лечения. В то время как инструментальное обследование эффективно только, когда ранняя стадия болезни.

При подозрении на тип А назначаются:

  • ПЦР;
  • на иммуноглобулины;
  • на антитела.
  • анализ на антиген;
  • проба на белки и антитела;
  • на определение кода вируса с помощью анализа ПЦР.
  • на наличие патогена;
  • на антитела;
  • ПЦР;
  • на интерлейкин-28 Бета.

Практически в любой форме заболевания для сдачи требуются одни и те же анализы.

При помощи инструментов

Лабораторная диагностика и обследование также включает инструментальное исследование. Оно проводится для определения точных размеров печени, а также для динамикой результативности лечения. Путем фиброэластографии можно следить за прогрессированием патогена, а также за изменениями в структуре и тканях печени без хирургического вмешательства. Фиброэластография проводится с помощью специального аппарата фиброскана.

Дифференциальный метод

Диагностика вирусных гепатитов с помощью дифференциального метода необходима для определения точного кода вируса и особенностей антигенов. Также данный метод помогает исключить других возбудителей (токсоплазма например), желтуху, пищевую интоксикацию, кишечные вирусы, желчекаменную болезнь и др. Она осуществляется с помощью различных лабораторных анализов.

Результаты и их расшифровка

При сдаче ПЦР результаты расшифровываются таким образом:

  • при содержании рибонуклеиновой кислоты менее 60 МЕ/мл — результат отрицательный;
  • при содержании рибонуклеиновой кислоты от 102 до 108 МЕ/мл — положительный;
  • при содержании рибонуклеиновой кислоты более 108 МЕ/мл — положительный с подозрением на тип вируса С.

Для подтверждения диагноза на наличие гепатита С проводится ВГС диагностика. На основании чего ставится диагноз. После получения ПЦР результатов и подтверждения наличия вируса специалист назначает дополнительные анализы для составления полной клинической картины.

Видео

Амбалов Юрий Михайлович — диагностика и принципы лечения острых вирусных гепатитов.

Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций

Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций подразделяются на несколько больших групп.

Прямые методы, состоящие в выявлении непосредственно в биологическом материале самого вируса или антител к нему.

Непрямые методы-заключаются в искусственной наработке вируса в значительных количествах, и его дальнейшем анализе.

К наиболее актуальным в повседневной практике методам диагностики относятся:

Серологические методы диагностики — выявление в сыворотке крови пациента определенных антител или антигенов в результате реакции антиген-антитело(АГ-АТ). То есть, при поиске у пациента определенного антигена используется соответствующее искусственно синтезированное антитело, и, соответственно, наоборот-при выявлении антител используют синтезированные антигены.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

Основана на использовании меченых красителями антител. При наличии вирусного антигена он связывается с мечеными антителами, и под микроскопом наблюдается специфическая окраска, которая говорит о положительном результате. При этом методе, к сожалению, невозможна количественная интерпретация результата, а только лишь качественная.

Возможность количественного определения дает иммуноферментный анализ(ИФА). Он похож на РИФ, однако в качестве маркеров используют не красители, а ферменты, превращающие бесцветные субстраты в окрашенные продукты, что и дает возможность количественной оценки содержания как антигенов, так и антител.

Отмывают не связавшиеся антитела и антигены.

Добавляют бесцветный субстрат, и в лунках с антигеном, который мы определяем, произойдет окрашивание, т.к. там будет связанный с антигеном фермент, после чего на специальном приборе оценивают интенсивность свечения окрашенного продукта.

По похожей схеме происходит и выявление антител.

Реакция непрямой(пассивной) гемаглютинации (РПГА).

Метод основан на способности вирусов связывать эритроциты. В норме эритроциты падают на дно планшета, образуя так называемую пуговку. Однако если в исследуемом биологическом материале находится вирус, он свяжет эритроциты в так называемый зонтик, который не упадет на дно лунки.

Если стоит задача выявления антител, то сделать это возможно при помощи реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В лунку с вирусом и эритроцитами закапывают различные пробы. При наличии антител они свяжут вирус, и эритроциты упадут на дно с образованием «пуговки».

Теперь остановимся на методах диагностики непосредственно нуклеиновых кислот исследуемых вирусов, и прежде всего о ПЦР ( Полимеразная Цепная Реакция) .

Суть этого метода заключается в обнаружении специфического фрагмента ДНК или РНК вируса путём его многократного копирования в искусственных условиях. ПЦР можно проводить только с ДНК, то есть для РНК-вирусов предварительно необходимо произвести реакцию обратной транскрипции.

Непосредственно ПЦР проводят в специальном приборе, под названием амплификатор, или термоциклер, который поддерживает необходимый температурный режим. ПЦР-смесь состоит из добавленной ДНК, которая содержит интересующий нас фрагмент, праймеров (короткий фрагмент нуклеиновой кислоты, комплиментарный ДНК-мишени, служит затравкой для синтеза комплиментарной цепи), ДНК-полимеразы и нуклеотидов.

Стадии цикла ПЦР:

Деннатурация-первая стадия. Температура повышается до 95 градусов, цепочки ДНК расходятся друг относительно друга.

Отжиг праймеров. Температуру понижают до 50-60 градусов. Праймеры находят комплиментарный участок цепи и связываются с ним.

Синтез. Температуру вновь повышают до 72, это рабочая температура для ДНК-полимеразы, которая, отталкиваясь от праймеров, строит дочерние цепи.

Цикл многократно повторяется. Через 40 циклов из одной молекулы ДНК получается 10*12 степени копий копий искомого фрагмента.

При проведении ПЦР в режиме реального времени синтезируемые копии фрагмента ДНК метятся красителем. Прибор регистрирует интенсивность свечения и по ходу реакции строит графики накопления искомого фрагмента.

Современные методы лабораторной диагностики с высокой достоверностью позволяют выявить присутствие вируса — возбудителя в организме, нередко, задолго до появления первых симптомов заболевания.

Принципы диагностики вирусных болезней

Диагностика играет одну из решающих ролей в системе мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии.

Быстрый и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех в ликвидации вспышки болезни, так как позволяет четко выяснить эпизоотическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению поголовья животных с наименьшими потерями.

Для постановки диагноза требуются сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных. Поэтому диагноз — это результат кропотливой и вдумчивой работы.

На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся:

эпизоотологические данные, включающие сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных и т. д.;

клинические признаки болезни. Они включают определение (по сравнению с нормой) температуры тела, частоты и формы дыхания, частоты пульса, нарушения аппетита, поведения, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, функционирования органов пищеварения, выделения и т. д.;

патологоанатомические изменения, которые обычно устанавливают при вскрытии павших или вынужденно убитых животных. Различают макроскопические изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции, появление узелков, кровоизлияний, везикул и другие образования, не встречающиеся в норме, а также микроскопические изменения в клетках и тканях, обнаруживаемые гистологическими методами.

Чаще всего на основании этих данных можно поставить предварительный диагноз, так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения (например, парагрипп-3, вирусная диарея, инфекционный ринотрахеит, респираторно-синцитиальная и аденовирусная инфекции крупного рогатого скота или болезни Ньюкасла и грипп птиц и др.).

Кроме того, часто болезнь может быть вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами (например, вирусом и бактериями или двумя и более вирусами). Даже такое заболевание, как ящур крупного рогатого скота, можно довольно уверенно диагностировать по эпизоотологическим, клиническим и патологоанатомическим данным, однако требуются лабораторные исследования для определения типа и варианта возбудителя.

Несмотря на ориентировочный характер предварительного диагноза, он играет весьма важную роль, так как ориентирует ветеринарных специалистов на проведение соответствующих мероприятий.

Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза прежде всего зависит от правильности взятия материала (пробы) от больных и павших животных, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вирусного материала.

Читать еще:  Билирубин у новорожденных оценка лабораторных данных и врачебная тактика

Материал для исследования следует брать как можно быстрее после проявления четких признаков болезни или не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя (позже начинается бактериальное обсеменение, и по мере продолжения инфекционного процесса количество вируса может уменьшаться в результате воздействия защитных механизмов организма).

При взятии материала для выделения вируса следует исходить из патогенеза предполагаемой инфекции (входные ворота, пути распространения вируса в организме, места его размножения, клинические признаки и пути выделения). В лабораторию направляют тот материал, который с наибольшей вероятностью может содержать возбудителей болезни. При этом необходимо соблюдать следующие общие правила:

материал должен быть взят строго асептически;

материал должен быть немедленно законсервирован (помещен в термос с охлаждающей смесью или добавлением 50%-ного стерильного глицерина), чтобы предотвратить разрушение вирусов;

материал удобнее брать в стерильные пробирки с резиновой пробкой или во флакончики из под антибиотиков. Для исследования вполне достаточно 5—10 г материала;

на пробирках должна быть не смываемая этикетка; материал направляют с нарочным и сопроводительным письмом, в котором указывают хозяйство, вид больных животных, предварительный диагноз, вид и количество патологического материала, на что следует провести исследование, дату и фамилию врача.

В зависимости от симптомов болезни, а значит, и локализации возбудителя от больного животного может быть взят следующий материал:

смывы со слизистой оболочки носа, глаз, с задней стенки глотки, прямой кишки и клоаки у птиц. Берут их стерильными ватными тампонами, которые погружают в пробирки или флаконы, содержащие 3—5 мл соответствующей жидкости (раствор Хенкса, среды Игла, 199 и др.) с антибиотиками;

содержимое везикул, пустул, стенки везикул, корочки на коже; ^ фекальные массы непосредственно из прямой кишки;

кровь для выделения вируса и кровь для получения парных сывороток крови для обнаружения и определения титра антител. Для этой цели кровь берут дважды у одного и того же животного — в начале болезни и через 2—3 нед, т. е. в начале и в конце болезни.

От трупов патологический материал должен быть взят не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя животного. В качестве патологического материала берут кусочки органов, которые:

имеют видимые отклонения от нормы;

могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни;

наиболее часто содержат вирус: селезенка, печень, легкие, почки, головной мозг, лимфатические узлы.

В лаборатории часть материала берут для исследования, оставшуюся часть хранят в холодильнике на случай дополнительных исследований. Затем составляют план исследования присланного материала, который включает следующие задачи: обнаружение (индикация) вируса в материале; выделение (изоляция) вируса из материала; идентификация выделенного вируса;

при необходимости требуется доказать этиологическую роль выделенного вируса;

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Печень и её здоровье

Диагностика вирусных гепатитов важный этап в жизни в любого человека, ведь зачастую течение заболевания может долго не проявляться. А в это время наносить сильный вред организму человека. Помимо этого инфицированный человек, не зная о наличии болезни может долгое время инфицировать окружающих.

Важность диагностики при вирусном заболевании

Раннее исследование вируса С необходимо для того, чтобы предотвратить серьезные осложнения работы печени. Так как первые симптомы этого заболевания практически отсутствуют, а некоторые штампы и вовсе долгое время никак себя не проявляют.

Своевременное обнаружение и лечение помогают справиться с недугом на начальной стадии без инфицирования окружающих людей. Особенно раннее обследование необходимо женщинам во время вынашивания ребенка, так как есть вероятность инфицировать малыша.

Маркеры вируса

Заболевание делится на такие формы, как: инфекционный, лучевой, токсический и аутоиммунный.

Инфекционный делится на:

Токсический тип развивается вследствие воздействия алкогольных напитков, лекарств, наркотических и химических веществ. Это своего рода реакция организма на сильную и частую интоксикацию организма.

Лучевая форма болезни весьма редкая и является следствием продолжительного или частого ионизирующего облучения пациента. А вот аутоиммунный развивается на фоне атаки иммунитета организма собственного органа в силу различных сбоев.

Самым распространенным же считается именно инфекционный тип.

Симптомы для каждой стадии

У каждого из маркеров есть стадии инкубационного периода и период обострения при которых симптомы проявления разные. Но в каждой форме при инкубационном периоде признаки отсутствуют. Далее они у всех характерны:

  • расстройство ЖКТ,
  • повышение температуры тела,
  • усталость и боль суставов,
  • увеличение печени и боль при ее пальпации,

При хронической инфекции наблюдается:

  • изменение цвета мочи и кала,
  • появляется желтушность глаз и кожи,
  • может наблюдаться сыпь кожных покровов (при форме В),
  • боль в области правого подреберья становится постоянной,
  • желтушность ярко выраженная,
  • появляется отвращение к пище,
  • нарушается сон,
  • появляются носовые кровотечения (при форме С).

Также стоит отметить, что симптомы у всех могут быть различны, это зависит от иммунитета больного и сопротивляемости организма.

Симптомы при различных формах

При маркере А первые симптомы проявляются только по окончанию инкубационного периода болезни. Результаты пцр анализа помогают получить представление о составе крови пациента и выявление типа антигенов.

На основе этих данных удается понять, когда примерно было инфицирование и сопровождается ли инфекцией. После окончания инкубационного периода могут проявляться такие клинические признаки болезни:

  • расстройство ЖКТ,
  • слабость, вялость,
  • повышение температуры тела, озноб, повышенная потливость,
  • желтушность глаз, тела или языка.

Очень часто желтушность может и не наблюдаться, а остальные симптомы подходят и под другие заболевания. Так что больной может и не обратиться к врачу.

По сравнению с маркером А, тип В более опасен, так как может спровоцировать печеночный рак или цирроз. Данный штамп куда более агрессивен, но не передается через быт или при контакте с носителем. Клинические признаки:

  • боли в правой части тела на уровне ребер,
  • нарушение пищеварения (тошнота, рвота),
  • вялость, апатия,
  • боль в области суставов,
  • желтуха ,
  • моча темнеет, а кал светлеет.

Маркер С отличается тем, что чаще мутирует и не дает возможности для создания вакцины. Также от последствий этого типа чаще всего настает смерть.

Штамп имеет все те же симптомы, что и другие виды, но к ним добавляется увеличение размеров селезенки и печени. Заразиться можно через медицинские не стерилизованные инструменты, кровь, плазму.

Методы диагностики вирусных гепатитов

Методы диагностики вирусных гепатитов делятся на инструментальные, лабораторные исследования и дифференциально.

К инструментальным относится:

Лабораторный метод включает:

  • Биохимия состава крови. Дает данные о воспалении органа и активности гепатита.
  • Куагулограмма. С помощью этого метода оценивается показатель свертываемости крови.
  • Экспресс тест. Определяет наличие в крови появление антител.
  • Биопсия печени. С помощью биопсии можно получить данные о степени пораженности печени.
  • ПЦР. Метод помогает определить код инфекции.
  • ИФА. С помощью этого исследования определяется возможное инфицирование и наличие антител для борьбы с ним в крови.
  • исследование на билирубин. При сильном повреждении количество билирубина возрастает, поэтому результат дает краткую клиническую картину без забора образца органа.
  • Проба на белки.

Алгоритм на подтверждение гепатитов состоит в следующем:

  • сдача общего анализа крови и биохимии,
  • ПЦР,
  • исследование на антитела и антигены.

По результатам данных исследований назначается дальнейшее исследование и лечение.

Анализы

Лабораторная диагностика гепатитов дает возможность получить более полную картину о заболевании: его виду, степени прогресирования, реакции организма и тем самым помогает в назначении правильного лечения. В то время как инструментальное обследование эффективно только, когда ранняя стадия болезни.

При подозрении на тип А назначаются:

  • анализ на антиген,
  • проба на белки и антитела,
  • на определение кода вируса с помощью анализа ПЦР.
  • на наличие патогена,
  • на антитела,
  • ПЦР,
  • на интерлейкин-28 Бета.

Практически в любой форме заболевания для сдачи требуются одни и те же анализы.

При помощи инструментов

Лабораторная диагностика и обследование также включает инструментальное исследование. Оно проводится для определения точных размеров печени, а также для динамикой результативности лечения.

Путем фиброэластографии можно следить за прогрессированием патогена, а также за изменениями в структуре и тканях печени без хирургического вмешательства. Фиброэластография проводится с помощью специального аппарата фиброскана.

Дифференциальный метод

Диагностика вирусных гепатитов с помощью дифференциального метода необходима для определения точного кода вируса и особенностей антигенов. Также данный метод помогает исключить других возбудителей (токсоплазма например), желтуху, пищевую интоксикацию, кишечные вирусы, желчекаменную болезнь и др. Она осуществляется с помощью различных лабораторных анализов.

Результаты и их расшифровка

При сдаче ПЦР результаты расшифровываются таким образом:

  • при содержании рибонуклеиновой кислоты менее 60 МЕ/мл — результат отрицательный,
  • при содержании рибонуклеиновой кислоты от 102 до 108 МЕ/мл — положительный,
  • при содержании рибонуклеиновой кислоты более 108 МЕ/мл — положительный с подозрением на тип вируса С.

Для подтверждения диагноза на наличие гепатита С проводится ВГС диагностика. На основании чего ставится диагноз. После получения ПЦР результатов и подтверждения наличия вируса специалист назначает дополнительные анализы для составления полной клинической картины.

Видео

Амбалов Юрий Михайлович — диагностика и принципы лечения острых вирусных гепатитов.

Загрузка…

Источник: KardioBit.ru

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector