2 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Способы выявления лямблиоза

Диагностика лямблиоза

Лямблиоз — паразитарное заболевание, относящееся к группе кишечных инфекций. Возбудитель, проникая в организм человека, вызывает поражение органов пищеварения (кишечника, двенадцатиперстной кишки, печени). Болезнь распространена как среди взрослых, так и в детских коллективах.

По сведениям статистики, лямблиоз обнаруживают при обследовании у 3–15% взрослого населения и у 30–40% организованных детей, включая школьников. Показатель выше в слаборазвитых странах. Своевременная диагностика лямблиоза позволяется вовремя провести противопаразитарное лечение и избавить людей от развития хронической патологии желудочно-кишечного тракта.

Какие свойства возбудителя необходимо учитывать в способах диагностики?

Первым описал причину заболевания русский доктор Д.Ф. Лямбль в 1859 г., с его именем и связано название паразита и заболевания. В европейских странах эта роль отдается французу А.Жиарду, поэтому можно встретить еще наименование болезни, как «жиардиаз».

Лямблия является простейшим одноклеточным жгутиковым микроорганизмом. Паразитирует в основном в начальных отделах тонкого кишечника человека (двенадцатиперстной и тощей кишке). Может существовать в двух формах: вегетативной (трофозоит) и спорах (цисты). Под микроскопом их несложно распознать по характерной грушевидной форме, присоскам и четырем парам жгутиков.

Лямблии питаются через оболочку путем всасывания из кишечника нужных веществ, отнимая их у организма зараженного человека. Размножение осуществляется быстро делением, удвоение численности происходит каждые 10–12 часов. Цисты лямблий снабжены двухконтурной капсулой, овальные по форме.

Находятся только в толстой кишке, выделяются с калом больного во внешнюю среду, где длительно сохраняют жизнеспособность. Эта особенность позволяет сравнительно просто организовать диагностику лямблиоза по исследованию испражнений. Человек заражается через немытые руки, овощи с грядки, воду, загрязненные пищевые продукты, в быту фекально-оральным путем. Возможными переносчиками цист служат домашние животные, мухи, тараканы.

По какой симптоматике можно заподозрить лямблиоз?

Чтобы обнаружить лямблиоз, необходимо знать симптомы заболевания и учитывать возможные формы течения. Предполагаемый диагноз возникает у врача при анализе жалоб пациента, осмотре. Заболевание имеет острую и хроническую форму. Важной особенностью считается практически бессимптомное носительство у ¼ пациентов, слабовыраженные проявления — в половине случаев (субклиническое течение).

Только у 25% зараженных выявляются типичные симптомы лямблиоза (манифестное течение). В зависимости от превалирования признаков поражения органов и систем принято различать 4 формы болезни:

  • кишечную — проявляется расстройством функционирования тонкого и толстого кишечника по типу дуоденита, энтерита и гастроэнтерита, вызывает дуодено-гастральный рефлюкс;
  • билиарно-панкреатическую — симптомы лямблиоза у взрослых и детей похожи на клинику воспаления и дискинезии желчного пузыря, выводящих путей, панкреатита;
  • внекишечную — отличается токсическими и аллергическими признаками, сопровождается неспецифичным астено-невротическим синдромом, вегетососудистой дистонией;
  • смешанную — по симптомам сложно в диагнозе определить вариант поражения, для подтверждения необходим анализ на лямблиоз.

Симптомы лямблиоза обычно появляются спустя 1–3 недели после заражения. Такова продолжительность инкубации цист до превращения в вегетативную форму. В острой фазе воспаления пациенты жалуются:

  • на неинтенсивные боли вокруг пупка, в подреберье справа;
  • снижение аппетита;
  • тошноту;
  • тяжесть в зоне эпигастрия;
  • отрыжку;
  • усиленное газообразование в животе;
  • склонность к диарее (стул до 5 раз за сутки, водянистый, пенистый, затем приобретает жирный блеск), понос может чередоваться с запором.

Если лямблиоз переходит в хроническую стадию, то пациенты заметно худеют, становятся раздражительными, страдают от повышенной усталости, слабости, непостоянных признаков гастродуоденита, дискинезии кишечника, еюнита (воспаление тощей кишки). Выраженность интоксикации зависит от массивности попадания цист в организм человека, длительности болезни.

Возможно повышение температуры, воспаление региональных лимфоузлов, аденоидов. Действием токсинов при лямблиозе на нервную систему объясняется резкая смена настроения, раздражительность, головокружение, снижение артериального давления.

В детском возрасте при обследовании неврологи обнаруживают нервные тики, навязчивые движения (гиперкинез), склонность к обморокам. Изменения кожи заключаются в повышенной сухости с шелушением, зудящих высыпаниях в виде пузырьков, кератозе, крапивнице, других видах дерматита.

Заподозрить лямблиоз у пациента необходимо при упорном блефарите и конъюнктивите (воспалении век и оболочек глаза). Аллергические проявления иногда доходят до астматического бронхита и бронхиальной астмы.

Как выявляют лямблиоз лабораторными способами?

Из приведенных клинических симптомов лямблиоза видно, что пациенты с подобными проявлениями могут длительно лечиться у гастроэнтеролога, невролога, окулиста, дерматолога, аллерголога-иммунолога. УЗИ, холецистография только подтвердят наличие повреждения гепатобилиарной системы, но не помогут в выявлении причины.

Общие лабораторные методы мало специфичны для лямблиоза, но показывают уровень нарушений:

  • В общем анализе крови обычно настораживает моноцитоз и эозинофилия.
  • Среди биохимических тестов выявляется снижение белка крови (как альбуминов, так и глобулинов), рост фермента щелочной фосфатазы.
  • В анализе кала обнаруживаются копрологические признаки воспаления и нарушения переваривания: много жировых включений, непереваренные волокна, слизь, лейкоциты, эритроциты.

Современный уровень диагностики требует обязательного проведения паразитологического анализа на лямблиоз. Учитывая этапность развития микроорганизма диагноз должен подтверждаться выявлением в кале цист лямблий, в содержимом двенадцатиперстной кишки — вегетативных форм. Для этого проводят микроскопию мазков взятого материала.

Начиная с подросткового возраста, микроскопическим способом можно выявить лямблии в желчи, ее исследуют после дуоденального зондирования. Эта процедура у детей невозможна. Микроорганизмы обнаруживаются на стекле (инвитро) по характерным признакам, для улучшения выявляемости лямблиоза используется специальная окраска.

Инфекционисты рекомендуют для более точной выявляемости учитывать цикличность размножения и выделения форм паразита с испражнениями. Для этого лучше сдать анализ повторно за месяц от трех до пяти раз с перерывами в 1–2 недели.

Метод прост в проведении не требует больших затрат. Забор кала производится в специальную стерильную емкость. Необходимо взять подозрительные скопления слизи, частицы с измененным цветом. Цисты обнаруживают при доставке в течение суток. Обнаружить вегетативную форму лямблий значительно сложнее, поскольку они погибают через 60 минут после дефекации. Значит, материал должен быть доставлен как можно быстрее или забор следует производить в лечебном учреждении.

Косвенное значение имеет исследование кала на кишечную флору. Подсчет показывает способность лямблий снижать долю бифидо- и лактобактерий, стимулировать рост прочих микроорганизмов, активизировать появление патогенных стафилококков, стрептококков, грибков.

Диагностика лямблиоза (лямблий). Анализы на лямблиоз

Для диагностики лямблиоза используют несколько методов (анализов на лямблиоз), основным из которых являются обнаружение цист лямблий в кале пациента, в содержимом двенадцатиперстной кишки (лабораторная диагностика) или при заборе кусочка ткани тонкого кишечника (биопсия).

Лабораторная диагностика лямблиоза (лямблий), анализы на лямблиоз

Диагностика лямблиоза основывается, прежде всего, на результатах исследования кала (цистные формы) и содержимого двенадцатиперстной кишки (вегетативные формы). Это основные анализы на лямблиоз.

Необходимо провести не менее трех исследований кала 3 дня подряд с интервалом в 10-12 дней, причем целенаправленно на цисты лямблий. Для более достоверного выявления цист лямблий желательно сдавать кал в промежуток времени 2-3 дня до полнолуния, полнолуние, 2-3 дня после полнолуния — как было замечено, в этот период паразиты (как лямблии, так и глисты) ведут себя более активно. При наличии очень плотного кала накануне вечером ребенку можно дать слабительное (половина суточной дозы, например, сульфат магния из расчета 0,5 г на год жизни ребенка, дуфалак), а утром кал собирается для исследования. Забор кала производится в чистую сухую (стерилизовать не обязательно) пластиковую или стеклянную посуду чистой ложечкой или шпателем из нескольких «подозрительных» участков (там, где есть слизь, измененный цвет или консистенция) в общем объеме 1-2 чайных ложек.

Цисты лямблий сохраняются в оформленном кале до 10 дней и более, исследование можно проводить в течение суток с момента забора материала (следить, чтобы кал не высох). При формах, сопровождающихся поносом, можем рассчитывать на обнаружение вегетативных форм. Однако в этом случае кал следует доставить в лабораторию не позже, чем через 15-20 мин. после дефекации (вегетативные формы погибают через 30-60 мин.), что технически затруднено, с чем и связана сложность диагностики острого лямблиоза.

Микроскопию дуоденального содержимого следует осуществлять как можно быстрее после забора материала, пока он теплый (более информативен метод формалин-эфирного осаждения) — в этом случае обнаруживаются вегетативные формы.

Энтеротест на лямблиоз

Последнее время приобретает все большее диагностическое значение новый метод использования нейлоновой нити. Метод состоит в проглатывании желатиновой капсулы, внутри которой находится нейлоновая нить. При попадании в кишечник капсула растворяется, и паразиты прилипают к данной нити. По истечению двух часов нить выходит вместе с каловыми массами и подвергается микроскопическому исследованию.

Биопсия кишечника для диагностики лямблиоза (лямблий)

Один из самых ценных в диагностическом отношении методов, поскольку позволяет не только получить данные о присутствии паразитов, но и узнать, не изменена ли тканевая структура тонкого кишечника. Единственным минусом является дороговизна данной процедуры, поэтому её используют в случаях, когда трудно поставить точный диагноз, и есть подозрение на наличие опухолевидного процесса в кишечнике.

Иммунологическая (серологическая) диагностика лямблиоза

Для серологической диагностики лямблиоза (исследование крови) используют метод иммунофлюоресценции (75-80% достоверности). Специфические антитела обнаруживаются в крови через 2-4 нед. после заражения. В основу метода положено определение специфических антител в крови, направленных на борьбу с чужеродными микроорганизмами. Антитела (иммуноглобулины) представляют собой специальные белки со свойствами нейтрализовывать вредные бактерии, вирусы и другие патологические агенты, проникшие в организм человека. Иммуноглобулины обозначаются сокращённо латинскими буквами Ig.

Если обнаруживают IgM, то это обозначает, что имеется острая фаза патологического процесса.

Если обнаруживают IgG, то это обозначает хронический процесс.

Если же выявляют большие концентрации IgM и G, то это значит, что пациент хронически болеет лямблиозом и у него на данный момент времени наблюдается обострение заболевания.

Данный метод диагностики постепенно утрачивает свою ценность, поскольку нет 100% специфичности при определении иммуноглобулинов против лямблий. Это обозначает, что те же иммуноглобулины классов М и G могут появляться в ответ на проникновение других видов паразитов и бактерий. Новые технологии позволяют определять наличие специфических антител в каловых массах. В этих целях применяют такие методы иммунной диагностики как: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия, ELISA.

Биохимическая гепатограмма диагностики лямблиоза («печеночные пробы») — признаки дискинезии желчевыводящей системы с явлениями холестаза, повышение уровня щелочной фосфотазы, уровня 1-антитрипсина.

Развернутая копрограмма диагностики лямблиоза — исследование патологических копрологических синдромов.

Исследование желчи — нарушениия метаболизма желчных кислот, нарушение коллоидного состояния желчи.

В общем анализе крови могут определяться эозинофилия, лейкоцитоз, лимфоцитоз, несколько увеличена скорость оседания эритроцитов (СОЭ), не резко выражена анемия. Иногда показатели эозинофилии могут быть очень высокими, достигая степени лейкемоидной реакции эозинофильного типа.

Ультразвуковое исследование органов брюшной полости — для оценки состояния желчевыводящей системы, печени и поджелудочной железы.

Фиброгастродуоденоскопия — для исключения эрозивных или субатрофические изменения слизистой оболочки двендцатиперстной кишки, которые часто сопровождают лямблиозную инвазию.

Исследование кала на дисбактериоз: Лямблии отрицательно воздействуют на нормальную микрофлору кишечника, способствуя развитию дисбактериоза, в т.ч. кандидозного, т.к. грибы рода Candida выделяют витамины группы В, необходимые для жизнедеятельности лямблий. Проявления дисбиоза кишечника характеризуется значительным снижением содержания кишечной палочки (до 1-40 млн в 1г) и уменьшением или полным отсутствием бифидум- и лактобактерий. У детей раннего возраста на этом фоне выявляется условно-патогенная микрофлора: энтеробактер, клебсиелла, стафилококк, реже — протей, грибы рода Candida.

Читать еще:  Что делать при каротиновой желтухе

Диагностика лямблиоза

Лямблии — распространённые паразиты. Каждый второй ребёнок, посещающий детский сад, школу, подвержен риску заболевания. Каждый пятый взрослый – носитель. Основной источник заражения — вода.

Лямблии и лямблиоз

Выделяют два цикла развития паразита: трофозоит и циста. Функционал цисты – распространение. При поддержании необходимой влажности живет 70 дней в окружающей среде. Устойчива к концентрации хлора, используемой для обработки воды.

При реакции с секрецией желудка оболочка цисты растворяется, приобретает форму трофозоита. Десять личинок паразитов провоцируют инфицирование. Трофозоит при помощи присоски крепится к стенкам кишечника, становится цистой – делает невозможным выявление вегетативной формы в анализах кала при лямблиозе.

Методы исследования

Известны способы, позволяющие диагностировать заболевание у детей и взрослых. Обследования не дают 100% гарантированного результата. Важно подходить к процессу комплексно. Начальные шаги определит врач на основании жалоб, наличествующих симптомов.

Диагностика лямблиоза проводится прямыми и косвенными способами. В первом случае постановка диагноза основана на обнаружении цист, их ДНК; во втором — антител, вырабатываемых организмом, защищаясь от инфицирования.

Врач назначает способы диагностики:

  • копрограмма;
  • биопсия;
  • анализ на иммуноглобулины;
  • анализ на антиген;
  • ПЦР;
  • фиброгастродуоденоскопия;
  • энтеротест;
  • биохимическая гепатограмма;
  • ультразвуковое исследование печени.

Рассмотрим методы, сравним результативность.

Копрологические исследования

Копрограмма — исследование кала специальными реагентами.

Цистогенез (образование новых личинок) — процесс непрерывный, учитывая комфортную для размножения среду кишечника, в которую паразит заносится с водой, продуктами. Общий инкубационный период — 2 недели. При особо острых формах цисты попадают в кал на 5-7 сутки после заражения.

Рекомендуют проводить анализ с промежутком в 1 неделю на протяжении 4-5 недель. Учитывается «слепой» период – цисты могут отсутствовать. Посуда для сбора материала должна быть чистой, плотно закупориваться.

Paraset

Наряду с традиционным методом копрограммы используют прибор Paraset, увеличивающий шанс обнаружить паразитов. В пробирку наливается смесь эфира и формалина, закручивающаяся вместе с 1 г кала.

В лаборатории образец помещается в центрифугу. При скорости вращения 3000 оборотов в минуту лямблии проходят через фильтр, скапливаются в нижней части пробирки. Способ даёт быстрый результат, повышает достоверность исследования.

Инвазивные методы

Биопсия – ценный для диагностики метод, дорогостоящий. По анализу с высокой точностью можно диагностировать лямблиоз у взрослых, исключить подозрения на опухоль в желудочно-кишечном тракте. Основан на изучении небольшого кусочка ткани определенного органа.

Энтеротест

Используется для детской диагностики. Пациент глотает капсулу из желатина, внутри которой нейлоновая нить. Личинки паразитов налипают к нити. После выводятся из организма с каловыми массами, исследуются в лаборатории.

Дуоденальное зондирование

Фиброгастродуоденоскопия (дуоденальное зондирование) — манипуляция, проводимая врачом в стационарных условиях для извлечения и изучения содержимого двенадцатиперстной кишки.

Подготовка к исследованию проводится в течение 5 дней. В этот период прекращается приём желчегонных, слабительных, стимулирующих пищеварение лекарств.

Во время исследования при помощи зонда извлекается 20-25 мл желчи. Важно немедленно произвести микроскопическое исследование материала. Срочность необходима – вегетативные формы лямблий гибнут через 30 минут после извлечения. Метод трудоёмок, малоэффективен, применяется редко. Исследование назначают детям с 10 лет при условии тщательной подготовки к анализу. Переносится процедура тяжело, может оказать пагубное влияние на детскую психику.

Обнаружение лямблий в кале методом ПЦР. Экспериментальный метод молекулярной биологии. В основе лежит многократное копирование определенного участка ДНК. В природе подобным образом образуются раковые опухоли. В результате копирования должно получится количество генетического материала, достаточное для визуального анализа.

Копируется заданный участок ДНК, если он есть в исследуемом материале (кале). Лямблиоз диагностируется при наличии в кале ДНК паразита. Позволяет поставить диагноз в период отсутствия цист. Уровень достоверности метода — 98%. Исследование дорогостоящее, проводится в клиниках крупнейших городов.

Косвенные способы диагностики

Анализ на иммуноглобулины – серологическая диагностика относится к косвенным методам. Изучается сыворотка крови. Исследование показывает наличие антител, вырабатывающихся организмом в ответ на заражение. Анализ определяет инфекцию уже через 2 недели после заражения. Кровь из вены берётся натощак.

Различают IgM и IgG. Если обнаружено антитело первой группы – в организме происходит острая фаза патогенного процесса, если второй – хроническое течение, M и G – свидетельство хронической формы лямблиоза в период обострения. Количество антител повышается с интенсивностью заражения.

На уровень антител влияет ряд факторов, что иногда дает ложноотрицательные результаты. Пример: у детей с сильно сниженным иммунитетом, рецидивирующим заболеванием антитела не обнаруживаются. При перекрестной реакции с антителами на других паразитов дает ложноположительный результат. Достоверность анализа — 75-80%.

Анализ кала на антиген (ИХА и ИМХ)

Достоверность метода близка к 100%. С помощью новейшей технологии выявляется антиген лямблий. Тест проводится быстро, особой подготовки не требует. Отсутствие субъективных факторов позволяет выявить цисты и вегетативную форму. В процессе исследования вмешательства в организм не происходит, что делает его удобным для детской диагностики. Исследуемый материал предоставляется в течении трёх суток (возможна заморозка).

Печеночная проба

Биохимическая гепатограмма используется в качестве эффективной альтернативы при невозможности проведения других анализов. Подходит для детской диагностики. Представляет обследование печени на основании результатов анализа венозной крови. Помогает выявить лямблии в печени (копрологические исследования ложноотрицательны).

Ультразвуковое исследование печени позволяет выявить поражение органа, использовать результаты для постановки диагноза.

Дисбактериоз

Анализ на дисбактериоз – лабораторная диагностика, в процессе которой исследуют каловые массы. Лямблия агрессивно воздействует на микрофлору желудочно-кишечного тракта, вызывает дисбактериоз, кандидоз. Грибы Candida – источник витаминов В, необходимые для жизни паразитов. У детей до 3 лет выявляется патогенная флора. Дисбактериоз — возможный симптом лямблиоза.

Сравнение методов

Большая часть лабораторий предоставляет исследование, определяющее антитела к паразитам. Анализ ошибочно диагностирует ложноположительный результат, быстро подтверждать с его помощью выздоровление недостоверно – IgG могут проявляться через полгода после окончания лечения.

Исследование кала на цисты распространённый, но не массовый способ диагностики. Если анализ совпадает со «слепым» периодом, в котором выделение цист не происходит, то анализ – ложноотрицательный. Следует повторить обследование через 3 дня (при необходимости до трех раз, либо по одному анализу в неделю на протяжении 4-5 недель).

Анализ на антиген обладает высокой достоверностью в сравнении с другими методами. Минус – процедура отсутствует в перечне услуг многих клиник. Проверочный тест на лямблиоз должен проводиться минимум через три недели после выздоровления – антиген 2 недели присутствует в организме, искажает результаты анализа.

ПЦР — отличный метод, но для большинства людей это чисто теоретическая возможность.

Профилактика лямблиоза

Для профилактики лямблиоза медики советуют тщательно мыть овощи и фрукты, употреблять только кипяченую воду, посещать периодически терапевта для уверенности в отсутствии угрозы здоровью.

Лямблиоз не смертельно опасное заболевание. Существенно подтачивает иммунитет человека. Следует быть осторожнее с домашними животными – могут являться переносчиками паразитов.

Современные аспекты диагностики лямблиоза у человека

*Импакт фактор за 2017 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Читайте в новом номере

Актуальность проблемы Лямблиоз – достаточно распространенное заболевание в мире [1], в Российской Федерации регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза в год. Из них 70% составляют дети в возрасте до 14 лет [2]. Эта цифра может колебаться в большую или меньшую сторону в зависимости от санитарно–бытовых условий, возможностей диагностики и настороженности врачей по поводу данной паразитарной инвазии [3]. Актуальность лямблиоза определяется также и тем, что его клинические проявления часто маскируются различными вариантами гастроэнтерологической патологии, синдромами избыточного роста кишечной флоры, мальабсорбции, поливитаминной недостаточности, а также развитием аллергических заболеваний – рецидивирующей крапивницей, атопическим дерматитом, гастроинтестинальной формой пищевой аллергии, которые без адекватной противолямблиозной терапии приобретают рецидивирующее течение [3,4]. Данное заболевание может отягощать сопутствующие заболевания желудочно–кишечного тракта, приводя к развитию синдрома мальабсорбции и длительной диареи [1,5]. Наиболее подвержены заболеванию дети. В России у детей в возрасте до 2 лет в организованных коллективах пораженность лямблиозом составляет 34,5%, а в 3–4 года – до 70%, в среднем у детей младшего возраста в организованных коллективах лямблиоз выявляют в 9,3% случаев и в 0,9% – у воспитываемых в домашних условиях [6]. Наиболее эндемичным регионом по лямблиозу в мире является Экваториальная Африка [7]. В этих регионах у детей инфицированность лямблиями впервые регистрируется после 3–4 месяцев по появлению в крови специфических IgМ–антител, а в возрасте 8 месяцев примерно у 80% детей выявляются диагностические титры специфических противолямблиозных IgM–анти­тел [8]. Передача инфекции чаще реализуется водным путем, реже – через продукты питания. Диаг­нос­тика лямблиоза является трудной за­да­чей: у некоторых больных с длительнотекущим лямблиозом антитела в сыворотке крови могут отсутствовать, что свидетельствует о неэффективности механизмов гуморальной защиты [9]. Антитела часто отсутствуют у страдающих лямблиозом детей с лимфатическим типом конституции; распространение практики постановки диагноза лямблиоза без проведения копрологического исследования нельзя считать оправданным.

Лямблиоз – достаточно распространенное заболевание в мире [1], в Российской Федерации регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза в год. Из них 70% составляют дети в возрасте до 14 лет [2]. Эта цифра может колебаться в большую или меньшую сторону в зависимости от санитарно–бытовых условий, возможностей диагностики и настороженности врачей по поводу данной паразитарной инвазии [3]. Актуальность лямблиоза определяется также и тем, что его клинические проявления часто маскируются различными вариантами гастроэнтерологической патологии, синдромами избыточного роста кишечной флоры, мальабсорбции, поливитаминной недостаточности, а также развитием аллергических заболеваний – рецидивирующей крапивницей, атопическим дерматитом, гастроинтестинальной формой пищевой аллергии, которые без адекватной противолямблиозной терапии приобретают рецидивирующее течение [3,4]. Данное заболевание может отягощать сопутствующие заболевания желудочно–кишечного тракта, приводя к развитию синдрома мальабсорбции и длительной диареи [1,5]. Наиболее подвержены заболеванию дети. В России у детей в возрасте до 2 лет в организованных коллективах пораженность лямблиозом составляет 34,5%, а в 3–4 года – до 70%, в среднем у детей младшего возраста в организованных коллективах лямблиоз выявляют в 9,3% случаев и в 0,9% – у воспитываемых в домашних условиях [6]. Наиболее эндемичным регионом по лямблиозу в мире является Экваториальная Африка [7]. В этих регионах у детей инфицированность лямблиями впервые регистрируется после 3–4 месяцев по появлению в крови специфических IgМ–антител, а в возрасте 8 месяцев примерно у 80% детей выявляются диагностические титры специфических противолямблиозных IgM–анти­тел [8]. Передача инфекции чаще реализуется водным путем, реже – через продукты питания. Диаг­нос­тика лямблиоза является трудной за­да­чей: у некоторых больных с длительнотекущим лямблиозом антитела в сыворотке крови могут отсутствовать, что свидетельствует о неэффективности механизмов гуморальной защиты [9]. Антитела часто отсутствуют у страдающих лямблиозом детей с лимфатическим типом конституции; распространение практики постановки диагноза лямблиоза без проведения копрологического исследования нельзя считать оправданным.
Впервые лямблии были обнаружены Левен­гуком (Leeuwenhoek) у больного с жидким стулом, и уже позже, в 1859 г. были описаны Д.Ф. Лямблем как возбудитель лямблиоза. Несмотря на давнюю историю изучения и важное медицинское значение, многие стороны патогенеза лямблиозной инвазии и биологии возбудителя остаются нераскрытыми [2,3]. Так, до сих пор является загадкой, как вегетативные формы лямблий (трофозоиты) являясь неинвазивными патогенами, не выделяя известных токсинов, способны вызывать длительную диарею. Не менее интересна и биология лямблий, позволяющая им выживать и колонизировать достаточно агрессивную среду тонкой кишки, преодолевая местные факторы защиты. Поразительным остается также и факт бессимптомного носительства лямблий у половины инфицированных [7,10]. В связи с этим в этой работе представлены современные данные, касающиеся проблем диагностики и особенностей иммунного ответа у инфицированных.
На основе морфологических исследований выделяют три вида лямблий: G. lamblia, G. muris и G. agilis [11]. Патогенной для человека и большинства млекопитающих считается только G. lamblia. Доказательств того, что два других вида могут вызывать заболевания у людей, нет. G. muris инфицирует главным образом грызунов, птиц и рептилий, а G. agilis найдена только у амфибий.
Особенности иммунного ответа
при лямблиозе
В экспериментальных и клинических наблюдениях показано, что при заражении лямблиями в организме человека развиваются ответные иммунные реакции у большинства инфицированных и в последующем происходит самопроизвольная санация, даже в отсутствие противолямблиозной терапии [10]. Кроме того, было отмечено, что у лиц проживающих в районах, эндемичных по лямблиозу, наблюдается большая устойчивость к вторичному заражению [3]. Приобретенный иммунитет против лямблий является не завершенным, и часто особенно у детей развиваются повторные эпизоды инфекции. Дети до 6 лет, в связи с незрелостью иммунной системы являются более восприимчивыми к инфекции, чем взрослые и подростки. Взрослые становятся особо восприимчивыми к лямблиозной инфекции только при развитии выраженного иммунодефицита [3,7,12]. В формировании противолямблиозного иммунитета основную роль играют клеточные механизмы. Кооперация В–лимфоцитов, продуцирующих IgA, и Т–лимфоци­тов–хел­перов (CD4+) необходима для контроля над данной инфекцией [13–15]. У пациентов с выраженным иммунодефицитом, связанным с дефектами в Т– и В–кле­точном звене, повышается восприимчивость к лямблиозной инфекции и наблюдается большое ее распространение [12]. Отмечено, что пациенты с клеточным иммунодефицитом более восприимчивы к инфекции, чем пациенты, имеющие избирательный дефицит IgA [12]. Анти­лямблиозные секреторные IgA играют важную роль в разрушении лямблий и санации кишечника, что было подтверждено целым рядом экспериментальных исследований [16]. Для других классов иммуноглобулинов (IgG, IgM) показан их цитотоксический эффект на лямблии и нарушение процессов инкапсулирования трофозоитов [3]. На продолжительность течения и тяжесть лямблиоза у человека влияет и состояние факторов местной неспецифической защиты кишечника. К ним относят в верхних отделах кишечника желчь и ее соли, слизь кишечника, а также целый ряд антимикробных веществ, образуемых клетками слизистой кишечника и содержащихся в пищеварительных секретах. Желчь обладает бактериостатическим действием, является мощным детергентом, а также ингибирует рост многих простейших. Желчь стимулирует цистообразование лямблий, а кишечная слизь способствует прикреплению лямблий к эпителию. К факторам, способным ингибировать рост лямблий в тонком кишечнике, относят ненасыщенные жирные кислоты, образуемые из триглицеридов пищи и особенно грудного молока (под действием липазы панкреатического сока или грудного молока при грудном вскармливании ребенка). Однако лямблии в силу колонизации верхних отделов, защищены от действия жирных кислот слизью и желчью. Более эффективными ингибиторами роста и развития лямблий в верхнем отделе кишечника являются секретируемые эпителием крипт кишечника белки дефензины [17]. Установлена способность кишечных эпителиоцитов, расположенных в области верхушек кишечной ворсинки, выделять NO и продукты распада окиси азота. Роль NO в контроле над инфекционными агентами, не вторгающимися в клетку, менее изучена. Как предполагают, продукты распада окиси азота или сама окись азота могут повреждать вегетативные формы лямблий, ингибировать инкапсулирование и выход из цисты вегетативных форм [4]. В процессе существования и эволюции лямблии оказались способными вырабатывать устойчивость к системе защиты энтероцитов, связанной с окисью азота. Они активно метаболизируют аргинин, тем самым лишая энтероциты необходимого субстрата для синтеза NO [4] и ослабляя важную систему защиты от инвазии энтеропатогенных возбудителей.
Диагностика лямблиоза
До сих пор наиболее часто применяемым тестом в лабораторной диагностике лямблиоза остается микроскопия осадочных компонентов фекалий или содержимого, полученного при дуоденальном зондировании с целью выявления цист лямблий. К сожалению, указанные тесты лабораторной диагностики лямблиоза обладают низкой чувствительностью, подвержены влиянию ряда субъективных и объективных факторов, среди которых такие, как непостоянное выделение цист при лямблиозе, трудность микроскопической идентификации, требование специальной подготовки персонала, занятого микроскопической диагностикой [18,19]. Основное ограничение микроскопического метода – его неспособность дифференцировать близко родственные разновидности, имеющие различное значение в патологии человека [20]. Суммируя данные литературы и собственный опыт для оптимизации копрологического исследования, мы использовали:
• 3–4–кратное исследование кала с различными интервалами (8–7 дней);
• исследование, по возможности, жидких фракций фекалий (прилежащей к тонкой кишке), собранных из 6–7 мест;
•• исключение приема медикаментов перед исследованием на 5–7 дней в связи с возможностью повреждения морфологии цист;
• применение консервантов при невозможности доставки материала в лабораторию в течение короткого времени (в частности, оптимальным для исследования на лямблии является консервант Сафаралиева).
Перспективными способами лабораторной диагностики лямблиоза у человека сегодня остаются методы иммунофлуоресценции и иммуноферментного анализа (Методические указания МУ 3.2.1173–02: «Профи­лак­тика паразитарных заболеваний. Серологические методы лабораторной диагностики паразитарных заболеваний»). Они позволяют выявлять антигены данных возбудителей в пробах фекалий и в сыворотке крови больных и носителей [21–23]. С этой целью используют коммерческие иммуноферментные и иммунохроматографические тест–системы, выявляющие специфические антитела в сыворотке крови и антигены в фекалиях [24] Они обладают большей чувствительностью (66,3–98,9%) и высокой специфичностью (92,6%) в отличие от рутинных микроскопических методов в диагностике лямблиоза. За рубежом сконструированы ряд диагностических ИФА тест–систем, работающих на выявление специфических противолямблиозных секреторных антител в слюне. Данные тест–системы прошли успешную апробацию и могут быть рекомендованы для использования в лабораторной диагностике лямблиоза [25]. Тест–сис­те­мы выявляют специфические суммарные иммуноглобулины (IgG, A, M), которые представлены по вкладу в оптическую плотность преимущественно IgG антител, а также специфические иммуноглобулины класса IgM. Используемый коэффициент позитивности позволяет оценивать степень инвазии, а также проводить оценку эффективности антилямблиозной терапии. Суммируя данные, повышенный уровень IgG антител отражает наличие хронического лямблиоза или начало стадии реконвалесценции острого лямблиоза (в сочетании с наличием IgM антител). Наличие только IgМ антител в зависимости от коэффициента позитивности отражает наличие острого лямблиоза при инвазии различной степени выраженности (те же авторы). Для более эффективного использования лабораторных тестов необходима разработка дифференциально–диагностических алгоритмов для рационального использования тест–систем. Параллельное использование копрологических и серологических методов диагностики позволяют более надежно и эффективно выявлять лямблиоз. Опыт использования комплексной диагностики лямблиоза на базе поликлиники Казанского НИИЭМ позволил нам разработать алгоритм диагностики лямблиоза, учитывающий данные копрологического и серологического исследования (табл. 1).
Серологическое обследование лиц с аллергическими заболеваниями показало, что у 63,8% больных был выявлен повышенный уровень антител к антигенам лямблий в сыворотке крови (серопозитивные лица). При этом 16% больных имели повышенный уровень IgМ антител, наличие которых является признаком активного заболевания, из них у 4,8% больных цисты не были выявлены, у 8,9% повышенный уровень IgM антител сочетался с наличием антител класса IgG, что мы расценивали, как реактивацию или реинфицирование при массивной инвазии. У 46,8% больных имел место повышенный уровень IgG антител в сыворотке крови. При этом доля больных с отрицательным цистовыделением была более высокой в группе больных с низким коэффициентом позитивности (от 1,0 до 2,0) по сравнению с больными с высоким коэффициентом позитивности – >2,0 (10,5 против 14,5). Таким образом, частота отрицательного цистовыделения связана с уровнем инфицированности, определяемым по наличию IgG антител.
Особую группу составили серонегативные больные с наличием цистовыделения, что объясняется, во–пер­вых, наличием иммунодефицита, когда иммунная система не способна нарабатывать антитела в достаточном количестве, даже при наличии активной лямблиозной инфекции. Особенно часто такая ситуация имеет место у детей при транзиторной младенческой гипогаммаглобулинемии. Во–вторых, может отсутствовать транслокация антигенов лямблий через кишечную стенку при невысокой степени инвазии и сохранности местного иммунитета [12]. В любом случае данный вариант требует индивидуального подхода как к диагностике, так и к лечению лямблиоза. Рекомендуемый нами алгоритм позволяет избежать ненужных многократных исследований, оперативно устанавливать диагноз лямблиозной инфекции и активность процесса (табл. 1).

Читать еще:  Сколько живет гепатит с вне организма

Лабораторные методы диагностики лямблиоза

Диагностика лямблиоза — задача трудная. Патогомоничные симптомы у заболевания отсутствуют. Зачастую клиническая картина лямблиоза наслаивается на таковую других заболеваний желудочно-кишечного тракта. Не всегда удается по целому ряду причин выявить антитела в сыворотке крови. У микроскопического метода также имеются свои ограничения — неспособность отличать близко родственные виды лямблий, а периодичность выделения цист делает копрологический метод диагностики менее информативным.

Анализ на лямблии включает в себя анализ кала, крови и дуоденального содержимого:

  1. Микроскопия нативного (неокрашенного) и окрашенного раствором Люголя мазка на предмет обнаружения цистных форм в оформленных и прецистных форм паразита в жидких испражнениях. При поносе и в дуоденальном содержимом выявляются вегетативные формы возбудителей.
  2. Обнаружение вегетативных форм лямблий при дуоденальном зондировании. Дуоденальная биопсия является наиболее надежным методом диагностики.
  3. Выявление антител к возбудителю в сыворотке крови с применением ИФА и РНИФ является более чувствительным методом. В некоторых лабораториях производятся анализы на выявление антигенов паразитов в кале. Данная методика при диагностике лямблиоза является более предпочтительной, чем поиск цист в фекалиях больного.
  4. Высокочувствительным считается молекулярно-генетический метод.
  5. Лямблии культивируются на искусственных питательных средах, но данная методика на практике не применяется.

В связи с отсутствием 100% чувствительности каждого из вышеперечисленных методов диагностика лямблиоза должна проводиться комплексно.

Рис. 1. На фото лямблии (вегетативная форма паразита, трофозоиты).

Паразитологическое исследование

При подозрении на заболевание сдаются анализы на лямблии: исследуются фекалии и дуоденальное содержимое. В фекальных массах выявляются цисты, при поносе (в жидких фекальных массах) выявляются и цисты и трофозоиты, в дуоденальном содержимом выявляются только трофозоиты (подвижные вегетативные формы паразитов).

Рис. 2. Лямблии под микроскопом.

Рис. 3. На фото подвижные вегетативные формы лямблий (на фото вверху) и циста паразита (фото внизу).

Читать еще:  Причины образования песка

Копрологический метод исследования

Копрологический метод исследования (анализ кала на лямблии) является наиболее доступным, но менее информативным. С его помощью выявляются цисты паразитов, выделяемые больным с фекальными массами с 5 — 7 дня заболевания прерывисто, через каждые 2 — 21 день (в среднем через 8 — 14 дней).

В «немой» период выделение цист прекращается. Это обстоятельство требует неоднократного исследования каловых масс и применения других лабораторных методик. В свежих фекальных массах, собранных за 15 — 20 минут до начала исследования, в 5% случаев выявляются вегетативные формы лямблий. В течение получаса или часа вегетативные формы погибают, а цисты «съеживаются» и сливаются с детритом, что делает невозможным их обнаружение.

Анализ на лямблии должны сдавать больные с заболеваниями желудочно-кишечного тракта со склонностью к хроническому течению, с сопутствующей нейроциркуляторной дисфункцией, с длительной эозинофилией и аллергическими заболеваниями.

Оптимизация копрологического исследования может быть достигнута следующим путем:

  • проведение 4 — 5 кратного анализа кала на лямблии с интервалами 7 — 8 дней;
  • исключение на 5 — 7 дней приема противопаразитарных препаратов;
  • при невозможности доставить в лабораторию свежесобранный кал рекомендуется применение консервантов с расчета на одну часть кала три части консерванта;
  • при запорах необходимо накануне проведения анализа кала на лямблии принять слабительное средство (гуталакс, сенаде и др.) и/или желчегонные препараты.

Рис. 4. На фото вегетативные формы паразитов — трофозоиты (электронная сканирующая микроскопия).

Рис. 5. Трофозоит (фото А) и цисты лямблий (фото В).

Микроскопия дуоденального содержимого

В дуоденальном содержимом при лямблиозе выявляются подвижные формы лямблий (вегетативные формы, трофозоиды) с большей частотой, чем в фекалиях. Однако если лямблии паразитируют в более низких отделах тонкого кишечника, получаются отрицательные результаты исследования. Исследования дуоденального содержимого должно проводиться одновременно с исследованием кала. В последнее время данный вид исследования применяется редко.

Рис. 6. На фото вегетативные формы (трофозоиты) Lamblia intestinalis, меченные антителами (флуоресцентное окрашивание, непрямая РИФ).

Иммунологические методы исследования

Анализ крови на лямблии сдается с целью выявления специфических иммуноглобулинов. Считается, что основным фактором патогенности Lamblia intestinalis (основным иммуногеном) является антиген Аг GSA-65, на основе которого созданы современные тест-системы, которые применяются для диагностики данного заболевания.

Методы иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунофлуоресценции (РНИФ) являются перспективными в лабораторной диагностике лямблиоза. С их помощью выявляются сывороточные иммуноглобулины классов G и M больных и носителей и антигены в пробах фекалий. Чувствительность и специфичность данных методов диагностики лямблиоза составляет более 90%.

  • Иммуноглобулины IgM и IgG появляются в крови с 12 — 14 дня заболевания. Наличие одновременно иммуноглобулинов IgM и IgG говорит о наличии у больного лямблиоза. После санации IgM исчезают, а IgG сохраняются до двух месяцев.
  • УровеньIgM (при отсутствии IgG) говорит о наличии острого лямблиоза у больных, инвазия у которых произошла не более 3-х месяцев назад.
  • Уровень IgG (в сочетании или без IgM) указывает на хроническое течение лямблиоза или на начальную стадию реконвалесценции острого лямблиоза.

Чем выше уровень антител в сыворотке крови больного, тем чаще наблюдается отрицательное цистовыделение.

Антитела не определяются у детей с лимфатико-гипопластическим диатезом и у больных с неэффективными механизмами гуморальной защиты, что способствует хронизации инфекционного процесса. Лечение лямблиоза в данном случае проводится по индивидуальным схемам.

Анализ на лямблии с одновременным использованием серологических и копрологических методов дает возможность более качественно выявлять заболевание. Диагностика лямблиоза только на основании результатов копрологических методов исследования считается неоправданной.

Рис. 7. На фото цисты Lamblia intestinalis.

Биопсия кишечника

Биопсия тонкого кишечника является ценным диагностическим методом исследования, позволяющая выявит и оценить степень повреждения слизистой оболочки и обнаружить паразитов. Методика используется в крайних случаях.

Рис. 8. При лямблиозе повреждаются ворсинки слизистой оболочки тонкого кишечника. На фото слева микроскопия биопсийного материала больного лямблиозом. На фото справа лямблии продвигаются к ворсинкам кишечника.

Дополнительные методы диагностики лямблиоза

При заболевании у больного проводится общий анализ крови.

Рис. 9. Эозинофилия говорит о развитии аллергических реакций у больного лямблиозом (фото слева). При длительном и тяжелом течении заболевания развивается анемия (фото справа).

Дифференциальная диагностика лямблиоза

Лямблиоз следует отличать от бактериальных и вирусных гастроэнтеритов. Схожую картину дают кишечные гельминтозы, бактериальная и амебная дизентерия.

Диагностика лямблиоза: возможные варианты и области их применения

Лямблиоз является одной из наиболее распространенных форм паразитарной инвазии, особенно среди детей младше 14 лет. Часто диагностика лямблиоза не проводится своевременно ввиду бессимптомного носительства вызывающих заболевание паразитов. Сегодня для достижения максимальной результативности лечения используют несколько вариантов лабораторных диагностических мероприятий, в ходе которых берут для исследования анализ кала, желчи или анализ крови. Для оценки эффективности проведенной лечебной терапии анализ на лямблии берется не только на этапе предварительной диагностики, но и по окончании лечения.

Особенности лабораторной диагностики

Лабораторная диагностика лямблиозной инвазии основана на методиках, в ходе которых выявляют цисты паразитов при анализе содержимого двенадцатиперстной кишки, каловых масс или при исследовании тканей тонкого кишечника (для проведения биопсии требуется небольшой кусочек исследуемого материала).

Следует отметить взаимосвязь, прослеживающуюся между временем попадания паразитов в организм и их обнаружением в исследуемом материале. С момента попадания лямблий в кишечник обнаружить их в каловых массах можно только спустя три недели. При этом заболевание на начальной стадии можно диагностировать по характерным симптомам, к которым относятся кишечные нарушения, болевой синдром, развитие аллергической реакции, дуоденита, энтерита или холецистита. В детском возрасте в течение длительного периода по вечерам может повышаться температура до 37,5 градусов.

Диагностика лямблиоза проводится с учетом возможной формы протекания болезни. Например, в хроническом варианте цисты появляются в исследуемом материале с некоторой периодичностью, поэтому требуется неоднократное взятие анализов с недельным интервалом в течение месяца. Основные методы диагностики лямблиоза включают микроскопический способ (одна из разновидностей — энтеротест), биопсию кишечника и иммунологические исследования. При необходимости проводится ряд дополнительных мероприятий.

Микроскопический метод

Микроскопия была и остается одним из наиболее часто используемых способов диагностики лямблиоза. В ходе процедуры для обнаружения цист лямблий делают анализ кала (берутся осадочные компоненты фекалий) или материала, полученного в результате дуоденального зондирования (желчи). К недостаткам такого метода диагностики относятся низкая чувствительность, невозможность дифференциации близко родственных разновидностей паразитов, оказывающих различное влияние на человеческий организм, и непостоянство присутствия в исследуемом материале вызывающих инвазию паразитов.

Такая лабораторная диагностика лямблиозной инвазии подразумевает взятие анализов в течение трех дней подряд с повтором процедуры через 10 дней. При слишком плотном кале перед сдачей анализа следует принять небольшую дозу слабительного (достаточно половины суточной дозы) в виде дуфалака или сульфата магния. Материал для исследования собирают утром в специальную емкость для сбора кала. При наличии в предназначенном для сдачи материале участков измененного цвета или нехарактерной консистенции с присутствием слизи для анализа берут именно их содержимое.

При подозрении на острый лямблиоз, когда заболевание сопровождается диареей, анализ кала должен быть сделан не позже, чем через 20 минут после забора, иначе исключается возможность обнаружения провоцирующих острое течение болезни вегетативных форм.

Энтеротест

Такая разновидность микроскопии основана на использовании специальной нейлоновой нити. В ходе процедуры пациент проглатывает желатиновую капсулу с находящейся в ней нейлоновой нитью. В кишечнике происходит растворение капсулы и освобождение нити, к которой прилипают цисты лямблий. Спустя два часа после начала процедуры происходит высвобождение каловых масс, после чего проводят микроскопический анализ кала.

Биопсия кишечника

Такой анализ на лямблии представляет наибольшую ценность, так как помимо сведений о наличии в организме паразитов удается получить информацию о произошедших в тканевой структуре тонкого кишечника изменениях. Недостатком методики является существенная стоимость процедуры, поэтому к ней прибегают при возникновении трудностей с постановкой точного диагноза или подозрении на развитие опухолевого образования в кишечнике.

Иммунологическое (серологическое) исследование

Лабораторная диагностика на базе иммунологии (для исследования берется анализ крови) заключается в выявлении специфических антител, которые помогают организму бороться с вызвавшими болезнь микроорганизмами. В результате исследования могут быть выявлены различные иммуноглобулины, по обозначению которых можно понять, на какой стадии находится заболевание в данный момент. Возможны такие варианты:

  1. Наличие иммуноглобулина IgG означает переход болезни в хроническую стадию.
  2. Наличие иммуноглобулина IgM означает течение острой фазы заболевания.
  3. В случае одновременного выявления существенных концентраций иммуноглобулинов G и M диагностируют обострение хронического лямблиоза.

Анализ крови на лямблиоз менее популярен в отличие от других методик из-за отсутствия специфичных иммуноглобулинов, характерных только для лямблиоза. Если в результатах анализа обнаруживаются указанные виды антител, требуется проведение дополнительной иммунной диагностики в виде иммунодиффузии, иммуноэлектрофореза или метода ELISA.

Дополнительные исследования

В ряде случаев для получения максимально точного результата применяются следующие методы диагностики лямблиоза.

Печеночные пробы или биохимическая гепатограмма

В ходе процедуры удается выявить нарушения работы желчевыводящей системы, сопровождающиеся признаками дискинезии, явлениями холестаза и превышением допустимых уровней 1-антитрипсина и щелочной фосфатазы.

Фиброгастродуоденоскопия

Необходима, когда есть подозрения на субатрофические или эрозивные изменения слизистой двенадцатиперстной кишки (данные нарушения являются одним из наиболее частых осложнений лямблиозной инвазии).

Общий анализ крови

По данным исследования можно выявить эозинофилию, оценить уровень лимфо- и лейкоцитоза, увеличения скорости оседания эритроцитов и выраженности анемии. В ряде случаев эозинофилия может характеризоваться достаточно высокими показателями, при которых диагностируют лейкемоидную реакцию эозинофильного типа.

Анализ кала на дисбактериоз

При лямблиозной инвазии происходит нарушение нормальной микрофлоры кишечника с развитием, в большинстве случаев, кандидозного дисбактериоза (именно выделяющие витамины группы В кандиды обеспечивают жизнедеятельность лямблий). В результатах анализа обнаруживается низкое содержание кишечной палочки и сниженное или практически полное отсутствие лакто- и бифидумбактерий. Если проводится диагностика лямблиоза у детей раннего возраста, анализ позволяет выявить условно-патогенную микрофлору, формируемую стафилококком, энтеробактером, клебсиеллой или протеем.

Также, может назначаться развернутая копрограмма, анализ желчи с оценкой изменений ее коллоидного состояния и метаболизма, и УЗИ органов брюшной полости, в ходе которого исследуется поджелудочная железа, печень и система, обеспечивающая вывод желчи.

Особенности диагностики детей

Диагностика лямблиоза у детей требует особенного внимания из-за существенного усугубления состояния в случае несвоевременного выявления заболевания. При исследовании детского организма основными методами являются иммунологический или серологический, дуоденальный и копрологический.

Первый вариант может применяться на начальном этапе развития лямблиоза не позже 4-хнедельного срока с момента попадания паразитов в организм. Дуоденальное исследование с анализом желчи проводится, начиная с 10-летнего возраста. В данном материале можно обнаружить лямблии практически в 100% случаев. Возрастное ограничение объясняется сложностью проведения процедуры.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector