0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Прц на гепатит в качественный и количественный метод

Исследования на вирус гепатита В (ИФА и ПЦР)

Антиген «s» вируса гепатита В (HBsAg)

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении — санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

для диагностики острого гепатита В:

  • инкубационный период;
  • острый период заболевания;
  • ранняя стадия реконвалесценции;

для диагностики хронического вирусного гепатита В;

при заболеваниях:

  • персистирующем хроническом гепатите;
  • циррозе печени;

для скрининга и выявления больных в группах риска:

  • больные с частыми гемотрансфузиями;
  • больные с хронической почечной недостаточностью;
  • больные с множественным гемодиализом;
  • больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.

Оценка результатов исследования

Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )

В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

  • хронического вирусного гепатита В при наличии HBs антигена в сыворотке крови;
  • перенесенного вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

    Антиген «е» вируса гепатита В (HBeAg)

    В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
    HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

    Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

    Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

    Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

  • инкубационного периода вирусного гепатита В;
  • продромального периода вирусного гепатита В;
  • острого периода вирусного гепатита В;
  • хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

    Антитела к антигену «е» вируса гепатита В (anti-HBeAg)

    Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

    Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

    Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

  • установление начальной стадии заболевания;
  • острый период инфекции;
  • ранняя стадия реконвалесценции;
  • реконвалесценция;
  • поздняя стадия реконвалесценции.
  • диагностика недавно перенесенного вирусного гепатита В;
  • диагностика хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Оценка результатов исследования

    Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

    Критериями наличия хронического гепатита В являются:

  • бнаружение или периодическое выявления ДНК ВГВ в крови;
  • постоянное или периодическое повышение активности АЛТ/АСТ в крови;
  • морфологические признаки хронического гепатита при гистологическом исследовании биоптата печени.
  • Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)

    Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
    Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

    Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

    Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

    Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

    Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

  • разрешения сомнительных результатов серологических исследований;
  • выявление острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или контактом;
  • контроля эффективности противовирусного лечения.
  • Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

    Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)

    Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
    Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

    Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

    • Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
    • менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
    • от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
    • более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

    Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

    Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

    Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

    Читать еще:  Холензим инструкция по применению форма выпуска дозировка отзывы аналоги и цена

    ПЦР на гепатит B

    Вирусный гепатит В является серьезным и опасным заболеванием. Опасность этой болезни заключается в осложнениях, которые следуют за ее основными проявлениями. Поэтому очень важно не запустить болезнь, и своевременная диагностика поможет этого добиться.

    Так как гепатит В в основном передается через зараженную кровь, основным методом диагностики этого заболевания является анализ этой биологической жидкости. В частности, это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Но как применяется метод ПЦР при гепатите В? Что собой представляет этот анализ? Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу на гепатит? Ответы вы найдете в статье.

    Что это за анализ?

    Полимеразная цепная реакция — это анализ крови, благодаря которому можно определить количество и концентрацию ДНК и РНК возбудителя. ПЦР позволяет своевременно диагностировать заболевание, нивелируя риск проявления серьезных последствий недуга. Для диагностики вирусного гепатита В берется небольшой образец венозной крови пациента.

    Основными задачами ПЦР на гепатит В являются:

    • Диагностика вирусного поражения печени на самом раннем этапе ее развития;
    • Уточнение диагноза при спорных результатах других анализов;
    • Выявление вирусоносительтва;
    • Определение генотипа и квазитипа патогена.

    Преимуществами данного вида диагностики являются высокий уровень достоверности и быстрое получение результатов. Различают количественный и качественный анализы ПЦР. Рассмотрим каждый из них подробнее.

    Количественный ПЦР при гепатите В

    Количественный ПЦР при гепатите С проводится для определения количества патогенного ДНК в плазме крови пациента. Определяемым фрагментом в данном случае становится уникальная ДНК-последовательность структурного вирусного белка.

    Количественный ПЦР применяется не только для постановки диагноза. При лечении гепатита В при помощи данного анализа можно установить действенность терапии по вирусной нагрузке. Если она снижается, лечение можно считать успешным.

    Расшифровка качественной полимеразной цепной реакции проводится в лабораторных условиях профильными медработниками. Ключевые показатели анализа представлены ниже:

    • От 75 МЕ/мл до 108 МЕ/мл — положительный результат;
    • Менее 75 МЕ/мл — отрицательный результат, возбудитель вирусного поражения печени не обнаружен.

    Если результат анализа положительный, можно говорить об обнаружении патогена в организме носителя, а также о сопутствующей вирусной нагрузке. В этом случае пациенту может быть назначено определенное лечение. Наиболее эффективной является терапия с применением инновационных противовирусных средств. Однако в настоящее время ВГВ признан излечимым только частично.

    Отрицательный ПЦР свидетельствует об отсутствии заражения возбудителем вируса гепатита В. Однако это не означает, что человек полностью здоров. Рекомендуется сдать анализы также и на другие типы гепатита. Особенно коварен гепатовирус типа С, который чаще всего провоцирует хроническую форму болезни без выраженной симптоматики. Поэтому заболевание важно своевременно диагностировать.

    Качественный анализ ПЦР

    Качественный анализ ПЦР при гепатите В нацелен на обнаружение патогена. Это — один из наиболее точных методов диагностики гепатовируса. Полимеразная цепная реакция на основе образцов венозной крови пациента проводится в режиме реального времени.

    Показатель свыше 75,0 МЕ на мл свидетельствует о наличии возбудителя заболевания в организме больного. Это может быть как вирусоносительтво, так и активная фаза опасного заболевания.

    В каких случаях показан ПЦР?

    Метод ПЦР при гепатите В — наиболее рекомендуемый гепатологами способ проверить наличие вируса в крови. Пройти анализ на полимеразную цепную реакцию рекомендуется в следующих случаях:

    • При наличии явных симптомов гепатита — тошноты, рвоты, желтушности склер и кожи, болей в области печени, обесцвечивания кала и потемнения мочи;
    • При внутривенной (инъекционной) наркомании;
    • При высоких показаниях АлТ и АсТ в результатах биохимического анализа крови;
    • При холестазе (застое в желчевыводящих путях);
    • Беременность или хирургическое вмешательство, предварительная подготовка к родам или операции;
    • При регулярных процедурах диализа или переливания крови;
    • Если состоялся половой акт с потенциально зараженным партнером.

    Количественный или качественный анализ ПЦР также может назначаться лицам, которые в прошлом уже переболели одной из форм гепатита. Таким образом мониторится состояние пациента, так как возможен рецидив.

    Как подготовиться?

    Любая диагностика вирусного заболевания требует подготовки, в противном случае результаты будут неточными. Перед сдачей крови на ПЦР количественный при гепатите В, пациенту следует:

    • Отказаться от тяжелой и насыщенной жирами пищи за сутки до явки на сдачу образца крови;
    • Не есть в течение последних 8 часов перед сдачей анализа;
    • Отказаться от употребления алкоголя и табачной продукции не менее чем за 1 сутки;
    • Избегать стресса и физической перегрузки, хорошо выспаться.

    Сбор образцов биологической жидкости для исследования проводится в утренние часы. Чаще всего анализ ПЦР на гепатит В сдается в 8 утра.

    Расшифровка результатов количественного и качественного ПЦР на гепатит В

    Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови. Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя.

    Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.

    О чем я узнаю? Содержание статьи.

    Что такое ПЦР на гепатит В?

    Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма.

    По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.

    ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.

    Показания к исследованию

    Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.

    Исследования проходят:

    • реципиенты донорской крови;
    • больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
    • инфицированные ВИЧ;
    • беременные женщины;
    • медицинские работники инфекционных отделений;
    • лаборанты, исследующие кровь;
    • больные с печеночными патологиями;
    • все потенциально зараженные;
    • люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.

    Количественный ПЦР проводится:

    • если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
    • после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
    • при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.

    Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.

    Виды ПЦР

    Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру.

    В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.

    Количественный ПЦР на гепатит В

    В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.

    По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.

    Качественный ПЦР

    Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз.

    В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты.

    Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.

    Расшифровка результатов ПЦР на гепатит В

    Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.

    Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.

    Что делать если при ПЦР подтвердили гепатит В?

    Важно обезопасить близких:

    • отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
    • пользоваться индивидуальным полотенцем;
    • изолировать раны.

    Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.

    ДНК и ПЦР вируса гепатита В

    Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

    ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

    • при возникновении признаков гепатита В у пациента;
    • во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
    • для уточнения эффективности терапии.
    Читать еще:  Что такое нарушение моторики желчевыводящих путей

    Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

    Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

    • нарастающая усталость при небольших нагрузках;
    • непривычная утомляемость;
    • тяжесть в области правого подреберья;
    • пониженный аппетит, тошнота;
    • желтушность кожных покровов, склер глаз;
    • светлый кал;
    • тёмная моча;
    • болезненные ощущения в суставах.

    Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

    Показаниями к ПЦР являются:

    • положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
    • острый и хронический гепатит;
    • микст-гепатиты;
    • количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
    • разработка тактики эффективной терапии.

    Подготовка к анализу

    Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

    Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

    • полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
    • воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
    • 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
    • прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
    • детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

    Как проходит исследование

    В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

    Амплификатор

    Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

    Расшифровка результатов

    Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

    Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

    • Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
    • Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
    • Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
    • Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

    Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

    Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

    Особенность полимеразной цепной реакции

    В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

    Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

    Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

    Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

    • конкретную вирусную нагрузку на печень;
    • интенсивность прогрессирования заболевания;
    • устойчивость к препаратам противовирусной группы;
    • результативность лечения.

    Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

    Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

    Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

    Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

    Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

    • количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
    • сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
    • маркеров вирусной инфекции;
    • результатов биопсии печени.

    Общие цели ПЦР

    Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

    • обнаружить носители вируса;
    • прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
    • убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
    • мониторить активность вируса на всех фазах развития;
    • выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
    • оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

    Преимущества метода

    В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

    Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

    1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
    2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
    3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
    4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
    5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
    6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

    Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

    Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

    Виды ПЦР на гепатит В и расшифровка результатов

    Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

    При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

    Виды ПЦР на вирусный гепатит В

    Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

    Качественный ПЦР и его трактовка

    Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

    • отрицательный результат — вируса нет;
    • положительный результат — вирус обнаружен.
    Читать еще:  Что обозначает носитель гепатита б и какова опасность

    Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

    В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

    Количественный ПЦР

    Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

    1. Перед назначением лечения.
    2. Для оценки эффективности терапии.
    3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
    4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

    Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

    1 МЕ/мл = 5 копий/мл

    Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

    Трактовка количественного ПЦР

    При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

    • 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

    Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

    • ДНК ВГВ 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

    Подготовка к обследованию

    Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

    1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
    2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
    3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

    Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

    Подводя итоги

    На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

    ПЦР на гепатит С

    ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

    Виды ПЦР

    ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

    Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

    Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

    При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

    Показания для анализа

    Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

    • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
    • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
    • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
    • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
    • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
    • У пациента диагностирован цирроз.
    • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

    Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

    Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

    Пациент должен следовать следующим правилам:

    • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
    • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
    • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
    • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

    Расшифровка результатов ПЦР-исследования

    Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

    Качественный анализ. Расшифровка

    ОбнаруженоПациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
    Не обнаруженоПациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

    Количественный анализ. Расшифровка

    Не обнаруженоЧеловек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
    До 1,8*10^2 МЕ/млКонцентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
    До 8*10^5 МЕ/млНизкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
    Больше 8*10^5 МЕ/млВысокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
    Больше 2,4*10^7 МЕ/млПоскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

    Обнаружена РНК определенного генотипаВ биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
    Обнаружена РНК вируса гепатита СВ биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
    Не обнаруженоЧеловек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

    Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

    В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

    1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
    2. Загрязнение образца крови.
    3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
    4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

    Преимущества ПЦР-анализа

    Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

    Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

    Недостатки ПЦР

    Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

    • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
    • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
    • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

    Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

    Цена ПЦР-анализа на гепатит С

    В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

    Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

    В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

    Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

    Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

    Ссылка на основную публикацию
    Adblock
    detector